如何在实验室用低温操作台上制备具有生物活性的大分子核酸

文章录入: 四度制冷  阅读量: 1338  添加时间: 2021/08/17

实验室用低温操作台制备样品是各类实验的常用操作。低温洁净工作台制备具有生物活性的大分子核酸.必须采取温和的制备条件.避免过酸、过贼的反应环境

实验室用低温操作台制备提取DNA的过程

在低温洁净工作台无论从什么材料中提取DNA.都包括以下基本过程

1. 在低温洁净工作台破碎细胞。

2. 在低温洁净工作台上进行加人蛋白酶消化液 (含有蛋白酶K .SDSEDTA)SDS可以破坏细胞膜和核膜,并可使DNA上结合的蛋白质与DNA分离,在不产生机械剪切力的前提下尽可能保持DNA的完整性,EDTA可以抑制Dnase的活性,蛋白酶K可以将蛋白质水解成小肽或氨基酸,蛋白酶KSDSEDTA存在的情况下仍可保持很高的酶活性。

3. RNase以去除RNA

4. 用苯酚-氯仿抽提法等反复抽提,使DNA进入水相与蛋白质组分分开。

5. ⑤收集上清液后用乙醉沉淀DNA.最后用TE级冲液溶解DNA.可用于DNA的含量及纯度的测定、PCR扩增、分子克隆操作等。

实验室用低温操作台真核生物组织细胞基因组 DNA的提取

1. 苯酚-氯仿抽提法酚、氣仿是有机溶剂,能有效地使蛋白质变性。

2. 纯酚的比重为1. 07,因此在与水混合时应处于下层。然而有机相和水相会难于分开,甚至当从溶质浓度较高的水相中抽提蛋白时会发生两相颠倒的情况。

3. 若使用份:氯仿混合物抽提,由于氯仿的比重较大 (1. 47),可在很大程度上解决这个问题.促进两相的分离。

4. 异戊醇则可减少操作过程中产生的气泡。变性蛋白-般集中在两相之间的界面层,而脂类则有效地分配在有机相中.核酸则被留于上层水相。

5. 该法具有操作条件比较温和,能迅速使蛋白质变性并同时抑制核酸酶的活性,可得到具有生物活性的高聚合度的核酸等优点。但其操作步骤较为繁琐,去除蛋白质需要反复进行多次.费时,所得到的核酸仍有部分降解。

在低温操作台、实验室用低温操作台、低温洁净工作台上制备具有生物活性的大分子核酸,都需要经过以上过程。四度医疗为实验室低温操作台厂家,可提供低温操作台价格和详细使用说明,并可根据实验室需要进行实验室用低温操作台的定制。

 


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